多功能净化柱—高效液相色谱法测定食品中毒黄素残留
摘 要：建立了MycoSep 226高效液相色谱测定食品中毒黄素残留的方法。结果表明，毒黄素在0.05 mg/L～10.0 mg/L范围内线性相关良好，线性相关系数大于0.999。回收率在80.0%～89.0%，相对标准偏差为1.8%～3.1%，方法检出限为0.1mg/kg。
关键词：高效液相色谱法；毒黄素；多功能净化柱
中图分类号：TS210.7 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2018）04-0000-00
毒黄素（TXF）是椰毒假单胞菌酵米面亚种（简称椰酵伯菌） [1]产生的毒性代谢产物，屬水溶性小分子脂肪酸类外毒素[2-4]，其引起的食物中毒是一种病死率很高的细菌性食物中毒[5，6]。通常发生于5-8月，多因阴雨天气、食品储存不当而变质，主要随加工原料或不卫生的加工方法污染多种食品。常见的污染食品为：发酵玉米面、糯玉米汤圆粉、吊浆粑、玉米淀粉、发酵糯小米、醋凉粉等；变质银耳；高粱米面制品；薯类制品如马铃薯粉条等[7]。食用被椰酵伯菌污染的食物易发生食物中毒[8]，重者将出现肝肾损伤及中毒性休克等症。因此，建立快捷、高效的毒黄素检测方法显得尤为重要。
1 材料与方法
1.1 仪器设备与试剂
LC-20 AD高效液相色谱仪配DAD检测器（岛津）；标准物质：毒黄素（Sigma-Aldrich）；多功能净化柱：MycoSep 226 （Romer）。
标准溶液的配制：称取毒黄素10.0 mg于10.0 mL容量瓶，甲醇溶解，配制成1.0 mg/mL储备液；各取上述储备液适量于10 mL容量瓶中，水定容，配制成一系列浓度标准工作液。
1.2 色谱条件
液相色谱柱：Zobax SB-C18柱（4.6 mm×150 mm，5.0μm，Agilent公司）；柱温：35 ℃；进样量20μL；流动相为：甲醇A与水B梯度洗脱，体积比为（0～8 min，7A：93B；8～12 min，90A：10B；12 ～17min，7A：93B）；流速1.0 mL/min。检测波长： 258 nm。
1.3 样品前处理
称取20 g样品，100 mL提取液（80乙腈+20水）混合后，超声提取30 min，取提取液，10000 r/min离心5 min。取上清液10 mL，过多功能净化柱。净化后，取净化液5.0 mL，N2吹干，1.0 mL纯水定容，涡旋溶解，0.22 μm滤膜过滤，待测。
2 结果与分析
2.1 色谱条件的优化
采用甲醇和水梯度洗脱流动相，有利于毒黄素和其他干扰化合物的有效分离，从而达到准确定量的目的。优化后的样品加标谱图及标准品谱图如图1所示。
2.2不同提取试剂的比较
选择70%甲醇水、70%乙醇水及70%乙腈水，考察其对回收效果的影响。结果发现，乙腈的提取效率、净化效果优于甲醇和乙醇。同时研究了不同体积分数乙腈水对提取效率的影响。选取10%～100%乙腈水，超声30 min，离心，取3.0 mL提取液N2吹干，1.0 ml水定容后分析发现乙腈体积分数为80%时提取效率最高，故选择80%乙腈水作为提取试剂。
2.3 线性范围及线性回归方程
配制毒黄素0.05mg/L～10.0mg/L系列标准溶液，以仪器响应的峰面积Y对应浓度X计算线性回归方程为Y=189.52X-13.314，相关系数r=0.9992，在相应浓度范围内线性良好。
2.4 回收率和精密度及检出限
在阴性样品中加入三个不同浓度水平的毒黄素标物进行加标实验， 平均回收率和RSD如表1所示。以S/N=3计算方法的检出限为0.1mg/kg。
3 结语
建立了毒黄素的高效液相色谱法。样品经乙腈水提取，经多功能净化柱净化，有效的去除了干扰。该方法准确，快速，适用于食品中毒黄素的检测。
参考文献
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作者简介：沈潇冰（1986—），男，浙江杭州人，本科，工程师，从事食品检测分析工作。