广东惠州地区中间型β地贫人群突变分布及与血红蛋白组分的关系
对照组。统计确诊的中间型β地贫患者数量及发病率、突变基因类型构成情况;比较两组一般资料、血常规（MCV、MCH）和HbA2;比较常见突变类型的HbA2。结果：确诊为中间型β地贫138例，发病率1.66%;按照突变基因类型构成比由高到低分别为CD41-42型51例、CD17型42例、IVS-1-5型37例、-28型3例、IVS-1-1型2例、IVS-Int 654型2例、CAP型1例;选取筛查阴性者147例为对照组，观察组MCV、MCH均低于对照组，HbA2高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）;常见基因类型CD41-42型、CD17型、IVS-1-5型HbA2含量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：广东惠州地区中间型β地贫人群突变常见基因类型为CD41-42型、CD17型、IVS-1-5型，但HbA2差异不大;中间型β地贫人群的血常规、HbA2与正常人群相比有明显差异。
【关键词】 中间型β地中海贫血; 广东惠州; 突变; HbA2
Mutation Distribution of Intermediate β Thalassemia Population in Huizhou of Guangdong Province and Its Relation with Hemoglobin Components/HE Jihong，YANG Hai，WANG Jian，et al.//Medical Innovation of China，2019，16（24）：0-064
【Abstract】 Objective：To study the mutation distribution of intermediate β thalassemia population in Huizhou of Guangdong province and its relation with hemoglobin components.Method：A total of 8 298 patients admitted to our hospital from May 2014 to May 2016 were eolled.Routine hematological parameters and HbA2 content were measured，the blood samples of suspected thalassemia patients with positive screening were tested for mutation gene types，the patients diagnosed as intermediateβthalassemia were taken as observation group，and those with negative screening were randomly selected as control group.The number of patients with intermediateβthalassemia，the incidence and the composition of mutant gene types were counted，the general data，blood routine（MCV，MCH） and HbA2 were compared between two groups，the common mutant types of HbA2 were compared.Result：A total of 138 patients of intermediate β thalassemia were diagnosed，with an incidence of 1.66%.According to the composition ratio of mutant gene types，51 cases were CD41-42，42 cases were CD17，37 cases were IVS-1-5，3 cases were -28，2 cases were IVS-1-1，2 cases were IVS-Int 654 and 1 case was CAP.147 cases of negative screening were selected as control group，MCV and MCH in observation group were lower than those of control group，and HbA2 was higher than that of control group，the differences were statistically significant（P<0.05）.There was no significant difference in HbA2 content among CD41-42，CD17 and IVS-1-5 genotypes（P>0.05）.Conclusion：CD41-42，CD17 and IVS-1-5 are the common mutation genotypes in the intermediate β thalassemia population in Huizhou of Guangdong Province，but HbA2 is not significantly different，the blood routine and HbA2 of the intermediate β thalassemia population are significantly different from those of normal population.
【Key words】 Intermediate β thalassemia; Huizhou of Guangdong; Mutation; HbA2
First-author’s address：The Third People’s Hospital of Huizhou City，Huizhou 516002，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.24.017
地中海贫血（Thalassemia，简称地贫）是人类常见的几种单基因遗传疾病之一，在我国西南地区较为常见[1]。本疾病患者由于珠蛋白基因发生突变或者缺失，导致红细胞结构异常，造成红细胞携氧能力降低和溶血性贫血[2-3]。根据变异基因的类型，可分为α、β、δβ和δ四种主要类型，其中β地贫按照临床表现可分为三种主要类型：重型、轻型和中间型，中间型β地贫的临床表现差异较大，单纯依靠临床症状确诊较为困难[4-5]。本实验通过分析惠州地区中间型β地贫患者的血液指标和基因检测结果，探讨其基因多样性及与血红蛋白组分（HbA2）的关系，为疾病的临床诊断和治疗提供相关的依据。现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2014年5月-2016年5月本院经门诊收治住院的8 298例患者。（1）纳入标准：年龄12～60岁的惠州本地居民;一般资料完整。（2）排除标准：妊娠期妇女;合并其他类型血液系统疾病;近期有输血史、应用血液毒性或促血细胞生成生成药物;合并恶性肿瘤和慢性缺氧性疾病等其他系统严重疾患。研究对象在参与治疗前均签署知情同意书，并经医院伦理学委员会审核。
1.2 仪器与试剂 （1）血常规：法国全自动血细胞分析仪（厂家：Horiba ABX，型号：ABX-DF120），其中平均红细胞体积（MCV）<82 fL并且平均红细胞血红蛋白含量（MCH）<27 pg为地贫筛查阳性。（2）血红蛋白：全自动Hb毛细管电泳分析仪（厂家：Sebia，型号：CAPILLARYS2）检测HbA2的含量，其中HbA2≥3.5%、血红蛋白F（HbF）>2%中一项阳性者为β地贫表型筛查阳性。（3）基因测定仪器：荧光定量PCR仪（厂家：Bio-Rad公司，型号：CFX96型）进行基因检测。
1.3 方法 对8 298例患者进行血液学常规指标和HbA2含量测定，将筛查阳性的疑似地贫患者的血液应用反向斑点杂交技术（reverse dot blot，RDB），检测17种我国常见的β地贫点突变基因，确定患者的突变基因类型[6]，将确诊为中间型β地贫患者作为观察组，随机选取筛查阴性者为对照组。
1.4 观察指标 统计确诊的中间型β地贫患者数量及发病率、突变基因类型构成情况;比较两组一般资料、血常规（MCV、MCH）和HbA2;比较常见突变类型的HbA2。
1.5 统计学处理 使用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 中间型β地贫发病情况 8 298例患者中，经血常规、HbA2和RDB共筛查出中间型β地贫阳性138例，发病率1.66%。
2.2 中间型β地贫突变基因类型构成比 检测出突变基因型中CD41-42型、CD17型、IVS-1-5型占比较高，具体构成见表1。
2.3 两组一般资料、血常规和HbA2比较 随机选取筛查阴性者147例为对照组;两组年龄、性别比较，差异均无统计学意义（P>0.05）;观察组MCV、MCH均低于对照组，HbA2高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。
2.4 中间型β地贫不同突变基因型者HbA2比较 因-28型、IVS-1-1型、IVS-Int 654型、CAP型患者例数较少，故此处不进行HbA2分析;CD41-42型、CD17型、IVS-1-5型HbA2含量分别为（5.37±1.37）、（5.21±1.02）、（4.86±0.81）%，差异无统计学意义（F=2.245，P=0.110）。
3 讨论
地贫是人类常见的单基因遗传疾病之一，目前最为常见的是α型和β型。地贫患者红细胞内无法产生足够正常结构的血红蛋白，造成红细胞携氧能力降低和溶血性贫血。中间型β地贫的临床表现差异较大，临床诊断较为困难[7]，需结合实验室检测。研究发现，地贫在我国南方地区发病率较高，尤其是广东地区，作为我国三大地贫高发地，疾病发生情况较为普遍[8]。由于目前国内外对于地贫的有效治疗手段较为匮乏，故临床上将产检作为预防地贫发生的重要手段，而基因检查是准确率较高的检查手段之一[9]。人群基因突变谱是由大多数常见突变类型和一些少见突变类型组成，而由于地域、环境及生活习惯间的差异导致各地区地贫患者基因突变的类型及比例存在较大差异[10-11]，由此可见针对不同地区地贫患者开展基因普查，可以为产前检查提供参考依据，旨在更有效的指导地贫的预防工作，为提高新生儿健康打下良好基础。本文选取本院门诊收治的β地贫患者为研究对象，通过对其进行实验室检查，探究该地区β地贫人群基因突变的分布及其HbA2特点。
本研究结果显示，8 298例患者筛查出中间型β地贫阳性138例，发病率1.66%。惠州位于广东省中南部，处在亚热带地区，是地贫的高发地带，其发病率较广东地区无明显差异[12]。本研究检测到7种突变基因类型，构成比最高的3种依次为CD41-42型、CD17型和IVS-1-5型，占总病例数的94.2%，CD41-42型构成比最高，其次是CD17型，该基因型分布情况和广东、广西地区相同[13]，而IVS-1-5型的构成比则明顯高于其他地区，一方面由于广东地区近30年人口流动性不断增高，导致惠州地区人群突变分布特点趋近广东地区的情况，另一方面，惠州作为客家人聚集地，有一定遗传异质性，导致其分布具有地区特点。
对比中间型β地贫患者和对照人群的相关指标，结果显示，观察组MCV、MCH均低于对照组，HbA2高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），分析这一现象，可能是由于中间型β地贫患者的β珠蛋白基因发生点突变，导致β珠蛋白合成减少或无法合成，血红蛋白α链与β链的合成比例失衡，未能配对的α链在红细胞内沉积并形成包涵体，严重影响红细胞变形能力，异常红细胞流经骨髓、脾脏受到破坏，导致血液中红细胞减少，MCV和MCH水平降低，β链减少导致多余的α链和δ链异常结合，造成HbA2水平增高[14]。
此外，对比中间型β地貧不同突变基因型患者的HbA2含量，CD41-42型、CD17型、IVS-1-5型HbA2含量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。中间型β地贫患者的临床表现介于轻型和重型之间，红细胞仍具有一定的β珠蛋白合成量，异常增高的HbA2经电泳后，几种突变基因型的检测结果无明显差异，说明惠州地区中间型β几种常见突变基因型难以通过检测HbA2进区分，仍需要RDB检测确定，而近年来基于我国两广和西南地区的地贫基因型筛查研究也显示处类似结论[15-20]。
综上所述，惠州地区中间型β地贫人群突变分布具有一定的地域特点，不同突变基因类型HbA2差异不大，需要通过基因检测确定类型。
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（收稿日期：2019-04-30） （本文编辑：董悦）