鸡蛋中粘杆菌素残留含量消除药代动力学研究

时间：2022-12-11 13:15:04 来源：正远范文网 本文已影响人

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供试仪器与试剂：高效液相色谱-三重四级杆串联质谱联用仪（Agilent G6410A LC-MSD QQQ）；全自动固相萃取仪（吉尔森公司）；Strata-X固相萃取净化柱（60 mg/3cc，Phenomenex公司）；硫酸粘杆菌素（Colistin sulfate）：含量78.3%，德国Dr.Ehrenstorfera公司；乙腈、甲醇、甲酸（Merck公司），均为色谱纯试剂；试验用水为Watsons蒸馏水；其余试剂均为分析纯。粘杆菌素原料药，含量83.6%，批号为KBT20121011，由湖北康宝泰精细化工有限公司提供。

1.2 试验方法

1.2.1 试剂配制。准确称取原料药24.0 g，用水稀释至10 L，配制成含粘杆菌素2 g/L的饮用水，早晚各配制1次。准确称取0.063 9 g硫酸粘杆菌素标准品，用2 g/L甲酸溶液配制成500 μg/mL的硫酸粘杆菌素标准储备液，置于4 ℃冰箱中避光保存。

1.2.2 动物给药与采样。配制含药浓度2 g/L的饮用水给鸡自由饮用，早晚给药，每天2次，连续给药12 d，其余正常饲喂，从给药第1天开始捡蛋并检测鸡蛋内的药物残留，直至药物残留消除。

1.2.3 样品提取。准确称取5.00 g鸡蛋样品，加入5%高氯酸15 mL，漩涡震荡3 min，摇床振荡20 min，超声提取30 min，4 ℃下10 000 r/min离心10 min，将上清液经润湿的滤纸过滤至离心管中，再加入10 mL乙醚，水平摇床上振荡10 min， 10 000 r/min离心7 min，弃去上层有机层，下层以待净化。

1.2.4 样品净化。全自动固相萃取仪自动过柱，以3 mL甲醇、3 mL水活化Strata-X固相萃取小柱，转移样品提取液至固相萃取柱，接着依次用5%甲醇水溶液3 mL、2%丙酮水溶液3 mL、纯净水3 mL淋洗，最后用0.2%甲酸/甲醇（3∶7，V/V）5 mL洗脱，洗脱液50 ℃下氮气吹至近干。浓缩液用2 g/L甲酸定容至1.0 mL，涡旋混匀，过膜转移至进样瓶，上机检测。

1.2.5 色谱条件。ZORBAX SB-C18色谱柱，2.1 mm×150.0 mm，3.5 μm；流动相：A相为2 g/L甲酸溶液，B相为0.1%甲酸乙腈溶液；梯度洗脱程序：0～5 min，10%～35%B；5～8 min，35% B；8～9 min，90%B；9～10 min，90%B；10.0～10.1 min，B瞬时变化为10%，并保持至16 min。流速：0.3 mL/min；进样量：20 μL。

1.2.6 质谱条件。电喷雾离子源，正离子扫描，多反应监测（multiple reaction monitor，MRM），雾化气压力（ion source gas 1，GS1）为50 psi，毛细管压力（Capillary）为4 000 V，干燥气流速（Gas Flow）10 L/min，干燥气温度（Gas Temp）350 ℃，各物质的质谱检测参数见表1。

1.3 数据处理

计算给药后每个时间点鸡蛋中药物浓度的平均值及标准误差，得到平均药物浓度— 时间数据，采用winnonlin药物动力学参数计算程序，使用微机自动进行处理每只鸡蛋中的药物浓度—时间数据，求出鸡蛋中药代动力学参数。

2 结果与分析

2.1 方法的线性关系、回收率、精密度和检出限

配制一系列标准工作溶液，做基质标准曲线，粘杆菌素以A和B的面积之和进行定量分析，其线性方程、线性范围和相关系数见表2。分别添加高、中、低3个浓度标准溶液，按试验方法进行处理分析，平均添加回收率（每个添加浓度平行测定6次）为70.8%～116.5%，相对标准偏差小于10.4%，结果见表2。检测限按3倍信噪比计算为0.11 μg/kg，定量限按10倍信噪比计算为0.37 μg/kg。

2.2 蛋鸡给药后鸡蛋中粘杆菌素药物浓度的测定

将给药后每日采集的鸡蛋样品按试验的分析方法进行处理、测定，以粘杆菌素A和粘杆菌素B标准曲线回归方程计算鸡蛋中粘杆菌素的浓度，并计算给药后每个时间点鸡蛋中药物浓度的平均值及标准误差，结果见表3。

2.3 药代动力学结果

采用winnonlin药物动力学参数计算程序，使用微机自动进行处理每只鸡蛋中的药物浓度—时间数据，求出鸡蛋中药代动力学参数，结果见表4。

3 结论与讨论

试验着重研究饮水给药试验中硫酸粘杆菌素E在鸡蛋内的残留情况及其消除规律。以2 g/L浓度的饮用水给鸡自由饮用，连续给药12 d，从检测结果分析，多粘菌素E在鸡蛋内K01-HL略大于K10-HL，说明药物的吸收分布比消除稍微缓慢一些，这与粘杆菌素的药物性质有关，临床上动物胃肠给药时粘杆菌素吸收不良，仅能在轻微程度上透过黏膜，即使黏膜表面红肿或烧伤部位局部给药也不吸收，内服后只有小于0.5%的药物被吸收，而且60%～80%从粪便中排出，脏器中分布极少，属于低残留药物[9]。但结果显示，蛋鸡长期连续用药也会引起鸡蛋内药物浓度的蓄积，虽然浓度不是很高，但也不宜长期用药。我国农业部公告第278号明文规定粘杆菌素禁止在产蛋期和产奶期应用，足以证明该药的残留毒性。因此，在研究的饮水给药试验中，用药鸡蛋的弃蛋期也应考虑5 d以上。

4 参考文献

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