拮抗核盘菌Bt菌株的筛选及抑菌活性研究
对照无显著差异。且该菌株抑菌谱较广，除核盘菌外，对小麦赤霉病菌Fusarium graminearum等其他9种病原真菌均有抑制作用。本研究获得的4AP1菌株对核盘菌具有较强抑制作用，且耐热耐强碱环境，为构建杀虫抗病Bt工程菌提供了菌株资源。
关键词
核盘菌；Bt菌株；抑菌活性；几丁质酶
中图分类号：
S 476
文献标识码：A
DOI：10.3969/j.issn.05291542.2017.06.009
Screening of and studying on Bt strains with antagonistic activity against
Sclerotinia sclerotiorum
Wang Meiling1，2，Geng Lili2，Duan Jiangyan1，Zhang Jie2
（1. College of Life Sciences， Shanxi Normal University， Linfen041004， China；
2.State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests， Institute of
Plant Protection， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Beijing100193， China）
Abstract
A total of 12 Bt strains with antifungal activity against Sclerotinia sclerotiorum were obtained from 170 strains of Bt strains by the plate confrontation test. Disease resistancerelated genes of 4 strains with higher activity were analyzed and all these strains contained chit gene. Chitinase activity of 4AP1 strain cell culture was 672.4 U/mL. The 4AP1 strain could withstand high temperature of 55℃ and pH 12， and its antifungal activity was not significantly different from the control. Moreover， the antimicrobial spectrum of 4AP1 strain was broad， except for S.sclerotiorum， which had antifungal activity against the other 9 fungal diseases such as Fusarium graminearum， etc. In this study， 4AP1 strains with strong antifungal activity against S.sclerotiorum， and heat and alkali resistance were obtained， and this provides strain resources for construction of engineering Bt with insecticidal activity and diseaseresistance.
Key words
Sclerotinia sclerotiorum；Bt strain；antagonistic activity；chitinase
油菜菌核病是由核盤菌引发的一种真菌病害，在全世界近100多个国家造成不同程度的危害[1]。核盘菌的寄主范围极其广泛，可寄生的植物多达75个科278个属408个种以及42个变种或亚种[2]。目前对核盘菌比较有效的防治方法是化学防治，但每年我国化学农药的使用量高达50多万t，对环境已造成严重的破坏，国际上部分国家已经限制使用化学杀菌剂[34]。而生物防治因其对环境友好且不易产生抗性等优点具有很好的开发前景。目前生物防治菌核病主要是应用木霉和芽胞杆菌等[58]，芽胞杆菌因其易于分离以及产生的芽胞抗逆性强等优点，在病害防治中占有重要的地位。
苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis，简称Bt，可产生多种杀虫晶体蛋白，对昆虫有很强的毒性作用，是一种应用最广泛的微生物杀虫剂[913]。Takahashi和Hyakumachi等研究发现，Bt fukuokaensis亚种B8882菌株和sotto亚种RG16菌株可以诱导植物产生系统抗性，通过增强植物自身免疫力而提高抗病性[1415]。Bt菌株可以分泌一些抗病抑菌活性物质，祁红兵等从80株Bt菌株中筛选到两株Bt菌株QB51和HD7，这2株菌株均具有较高的几丁质酶活力[16]；卢伟等筛选到19株Bt菌株，其分泌产生的几丁质酶对小麦赤霉病菌Fusarium graminearum Schwabe有抑菌活性[17]。许多细菌、病毒等都能够产生几丁质酶（chinitase，EC 3.2.1.14）。微生物所产生的几丁质酶与其他来源的几丁质酶一样分为外切几丁质酶和内切几丁质酶，而绝大多数微生物产生的是内切几丁质酶，能特异性地将几丁质中的β1，4糖苷键水解成N乙酰D氨基葡萄糖（NacetylDglucosamine，NAG）[18]。微生物几丁质酶活性的最适pH一般在3～10之间，而发挥抑菌活性的最适温度多在50～60℃，高于60℃酶容易失活[19]。